Разделение пигментов методом бумажной хроматографии

Материалы и оборудование: вытяжка пигментов из растительного материала; ацетон, этанол, бензин; стандартные и микробиологические пробирки или цилиндры с пробками, хозяйственные банки (на 1л) с полиэтиленовыми крышками, чашки Петри, хроматографическая бумага, пипетки.

При исследовании различных биологических соединений возникает необходимость, прежде всего, их выделить и очистить. Одним из наиболее известных и широко применяемых методов является хроматографический. Этот метод предложен русским ученым Цветом в 1906 году. Основан он на различной подвижности каждого компонента на определенном адсорбенте. В качестве адсорбентов могут быть использованы сахароза, окись магния, крахмал, бумага и т.д. Подвижность вещества зависит от его растворимости в растворителе, пропускаемом через адсорбент и адсорбируемости на данном адсорбенте. Чем выше растворимость пигмента в растворителе и чем хуже он адсорбируется на адсорбенте, тем больше его подвижность и тем дальше он будет расположен от стартовой полосы. Применяя разные комбинации растворителей и адсорбенты различной природы, можно добиться высокой степени разделения и очистки пигментов.

В настоящее время широкое распространение получил метод хроматографии на бумаге.

Ход работы

  1. Взять полоску хроматографической бумаги (2х12см) и на одном из её концов провести карандашом с помощью линейки тонкую линию, отступив от края 2,5 см — стартовая черта. На стартовую черту пипеткой нанести вытяжку пигментов, затем высушить в токе воздуха. Эту операцию повторить 5-7 раз до тех пор, пока не образуется яркая полоса. Таким образом, на хроматографической бумаге получается окрашенная зона, в которой сконцентрирована смесь пигментов. Полоску бумаги хорошо высушить в потоке воздуха (до исчезновения запаха растворителя).

После этого противоположный край хроматографической бумаги загнуть на 1,5-2 см и закрепить полоску на нитке скрепкой. Подготовленную таким образом бумагу поместить в широкую микробиологическую пробирку или цилиндр, на дно которого налить растворитель так, чтобы растворитель не касался зоны пигментов.

Цилиндр плотно закрыть пробкой или деревянной крышкой, оставив оба конца нитки на его внешней стороне (рис.1а). Полоска бумаги должна находиться в вертикальном положении и не касаться стенок цилиндра. До и после погружения хроматограммы пробирка должна быть плотно закрыта пробкой, и находиться на слабом свету во избежание фоторазрушения пигментов. Когда растворитель достигнет верхнего края хроматограммы, полоску бумаги вынуть и просушить на воздухе. На хроматограмме отметить положение полос, соответствующих определенным пигментам.

  1. На круглом обеззоленном химическом фильтре сделать по радиусу 2 надреза, не доходя до центра, и полученный «язычок» отогнуть немного вниз. В центр с помощью пипетки нанести стартовое пятно пигментов и следить, чтобы оно не расплывалось. Пятно должно быть интенсивно зеленого цвета, что достигается 2-3-кратным нанесением вытяжки. Затем просушить хроматограмму, положить её на края чашки Петри, куда налит растворитель (0,5см), опустить «язычок» в растворитель и плотно закрыть чашку крышкой. На хроматограмме пигменты будут расположены концентрическими кругами со стартовым пятном в центре (рис. 1в).
Хроматография
Хроматография

На хроматограммах, полученных каждым из трех способов, пигменты располагаются в одинаковом порядке.

Ссылка на основную публикацию
Adblock detector