Влияние температуры на активность сахаразы (инвертазы)

Материалы и оборудование:

прессованные дрожжи, кварцевый песок, ступка с пестиком, штатив с градуированными пробирками, воронка, фильтр, водяная баня, термометр, банка или большой стакан для бани с температурой 40°, спиртовка, пипетка, 1% раствор сахарозы, жидкость Фелинга.

Сахараза вызывает гидролитическое расщепление сахарозы на глюкозу и фруктозу по уравнению:

С12H22 O11 +H2O ® 2C6H12O6

Фермент катализирует также трансферазные реакции.

Ход работы

10-15 г прессованных дрожжей с небольшим количеством воды и кварцевого песка хорошо растереть в фарфоровой ступке до однородной массы. Добавить затем 15-20 мл воды, нагретой до 40°, и продолжать растирание 20-25 минут. Профильтровать через плоский фильтр, проследить, чтобы фильтрат был прозрачный. Если первые капли его будут мутные, слить обратно на фильтр. Налить в три пронумерованные пробирки по 5 мл раствора сахарозы. Первую поставить в стакан с холодной водой или снегом, вторую оставить при комнатной температуре (22-25°), третью поместить в водяную баню (45°). В четвертую пробирку прилить 2 мл воды, 1 мл вытяжки фермента и прокипятить на спиртовке. После этого в четвертую пробирку прилить раствор сахарозы до метки 6 мл и оставить при комнатной температуре.

Через 10 минут, когда температура растворов в первых трех пробирках примет температуру окружающей среды, прилить по 1 мл вытяжки фермента и поместить пробирки в прежние условия на 15-20 минут. По истечении этого времени во все пробирки прилить по 2 мл реактива Фелинга и нагреть до кипения.

Влияние температуры на активность сахаразы
Влияние температуры на активность сахаразы

Оценить количество образовавшегося осадка в баллах: много — 4 балла; умеренно — 3; мало — 2; очень мало — 1 балл; отсутствие осадка — 0 баллов. Результаты записать по форме таблицы 2.

Таблица 2

Температура  ,0С Окраска раствора и количество осадка Активность сахаразы, балл

Вычертить кривую зависимости активности сахаразы от температуры.

Сделать вывод и определить температурный оптимум активности фермента.

Ссылка на основную публикацию